求一株MC3T3-E1细胞，救救孩子吧，孩子的细胞养不起来呜呜呜

细胞凋亡是指在特定的生理或病理状况下，细胞依照自身的程序，自行终结其生命的过程。这是一个主动、高度有序且由基因控制，并有一系列酶参与的过程。磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine，PS）通常处于细胞膜的内侧，然而在细胞凋亡的初期，PS 会从细胞膜的内侧翻转至细胞膜的表面，展露在细胞外的环境当中。把标记有荧光素或者 biotin 的 Annexin V（一种 Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与 PS 具有高亲和力且能特异性结合）与 PC 结合，通过流式细胞仪或者

UBE2C促进SNAT2的单泛素修饰，抑制其多泛素修饰。 检测步骤： 第一步，筛选UBE2C蛋白底物SNAT2 IP-MS和泛素蛋白质组学检测发现：SNAT2是UBE2C泛素修饰的底物（图1a）。 第二步，UBE2C与SNAT2相互作用 Co-IP等实验检测证实UBE2C与SNAT2相互作用（图1 b-c）。 第三步，发现UBE2C促进SNAT2的单泛素化，阻断K63连接的泛素链的延伸 Co-IP分析显示发现UBE2C促进SNAT2的单泛素化，但阻断了泛素链的延伸（图1 d-e）。分别构建不同泛素突变体Ub-WT,K6R,K11R,K 27R, K29R, K33R，K48R，K63R(基

求救大佬们，这个是什么污染，我养的是hcc1806

液氮罐不但可以用来冷冻配件，常见的用途还有冻存胚胎，但细胞对环境敏感，稍有不慎便可能会被污染，用户使用存放胚胎的冻存罐时，要注意哪些污染呢？ 一、气体、微生物污染 当液氮罐存放环境不合适或使用不当时，比如空气中湿度大，开盖取样过程中水汽进入液氮罐内部，接触低温后，在内胆、颈管等部位凝结成冰，附着在内胆上，拿取样本时难度会增加，还可能破坏颈管，导致真空泄露，缩短液氮罐使用期限。 且长时间不去冰、清洁液氮

1.百萤活性氧(ROS)概述 活性氧(ROS)是具有化学活性的含氧分子，是作为细胞代谢的副产品自然产生的。在生理条件下，ROS水平受到仔细调节，它们在正常细胞信号转导、细胞周期、基因表达和体内平衡中充当信使。 当过量产生时，ROS有可能导致许多有害事件。在高浓度下，ROS会在细胞中诱导氧化应激，从而导致细胞大分子（如核酸、膜脂和细胞蛋白质）的后续损伤。这些生物分子的氧化损伤可引发细胞凋亡，与衰老有关，并与多种疾病、癌症和神经退

菌种保藏是指将具有特定生物学性质的微生物菌种以低温保存起来，做长效研究使用。说到低温保藏，那就是液氮罐。利用-196℃液氮完美留存活性。 液氮大家知道，现在美食行业利用其特性，不仅能让食品瞬间锁鲜，还能有效杀毒灭菌，既然灭菌，为何还用液氮罐保藏菌种？难道不害怕菌种死亡么？ 答:不用担心！ 因为菌种不是直接接触罐内的液氮！ 为了保证菌种安全，避免交叉污染等意外状况发生，在做菌种保藏前，就会根据微生物类别选择合适

一、百萤 活性氧ROS Brite HPF简介 活性氧（ROS）是含氧的化学反应性分子（如超氧化物，羟基，单线态氧和过氧化物）。由于存在不成对的价电子，ROS具有高反应性。 ROS形成氧的正常代谢的天然副产物，并且在细胞信号传导和体内平衡中具有重要作用。然而，在环境压力（例如，UV或热暴露）期间，ROS水平可显着增加。这可能导致细胞结构的显着损害。累积地，这被称为氧化应激。 ROS也由外源性源如电离辐射产生。在氧化应激条件下，ROS产生显着增加

三阴性乳腺癌（TNBC）是乳腺癌中最恶性的亚型。TP53突变是肿瘤常见的抑癌转促癌突变。在TNBC患者中，TP53突变率高达80%，其突变会导致化疗耐药或免疫治疗效果差等临床问题。因此，迫切需要阐明分子机制并确定TNBC进展的新靶点。 2024年7月，山东大学杨其峰团队在Adv Sci（IF=14.3）上，发表“CircCFL1 Promotes TNBC Stemness and Immunoescape via Deacetylation-Mediated c-Myc Deubiquitylation to Facilitate Mutant TP53 Transcription”的研究成果，提示了TNBC中突变TP53调控的新机制，并为TNB

核酸电泳常见问题 1. 无条带或条带较弱 （1）上样量不足 尝试进一步增加上样量。 （2）核酸降解 在核酸提取和电泳过程中，使用分子生物学等级试剂，切勿使用含核酸酶的耗材，避免核酸酶污染。 （3）电泳缓冲液使用不当 TAE缓冲液短期内更适用于分离大片段，长时间运行易产热；TBE缓冲液对于更短片段更好，适用于长时间运行而不易导致过热，但可能会减缓线性dsDNA的迁移。 （4）DNA跑出凝胶 DNA小片段分子量较小，迁移速率快，容易跑出凝胶。可

1.百萤 SO Green 520WS单线态氧探针参数 Ex -- Em -- 分子量 N/A 溶剂 DMSO 存储条件 在-15℃以下保存，避光防潮 2.百萤 SO Green 520WS单线态氧探针介绍 SO Green 520WS 单线态氧探针被开发为水溶性荧光探针，用于检测细胞外单线态氧，因为它不渗透细胞。它对单线态氧具有高度选择性。与其他可用的荧光和化学发光单线态氧检测试剂不同，SO Green 520WS 单线态氧探针不会对羟自由基、超氧化物或其他活性氧 (ROS) 显示任何明显的响应。该指示剂仅呈现微弱的蓝色荧光。

适用于无血清培养 原代培养所需营养 实用于杂交瘤等细胞培养..[图片][图片] 需要

鼻咽癌（NPC）是一种影响头颈部的癌症。目前，化疗是局部晚期鼻咽癌（LA-NPC）患者的标准方案。然而，约10%的鼻咽癌患者出现化疗耐药，导致预后不理想。因此，阐明化疗耐药的分子机制至关重要。 2024年7月，中山大学唐玲珑和赵银团队在Adv Sci（IF=14.3）上，发表“DCAF7 Acts as A Scaffold to Recruit USP10 for G3BP1 Deubiquitylation and Facilitates Chemoresistance and Metastasis in Nasopharyngeal Carcinoma”的研究成果，发现DCAF7在体外和体内促进鼻咽癌细胞的顺铂耐药和转移。 图

肿瘤即使在含氧量正常的情况下，也会利用糖酵解作为能量代谢的主要来源，这种Warburg效应，促使肿瘤细胞具有丰富的乳酸代谢特征。肿瘤乳酸的促癌机制，是肿瘤靶点开发的重要内容。 2024年3月，同济大学、复旦大学及安徽科技大学等多单位合作在J Clin Invest（IF=13.3）上，发表“The alanyl-tRNA synthetase AARS1 moonlights as a lactyltransferase to promote YAP signaling in gastric cancer”的研究成果，研究发现tRNA合成酶丙氨酰-tRNA合成酶（AARS1）具有乳酰转移酶活性，通过修

胎牛血清香港进口清关到国内

STI-PCR（SuppressionThermo-Interlaced PCR）扩增DNA片段超能力：用引物合成DNA片段7 kb；任意序列拼接24 kb；基因组扩增38 kb。 按：生命科学研究不断走向纵深，从单基因研究到系统生物学研究，都离不开对基因的操纵。过去，PCR技术极大的推动了生命科学研究的进程。现在，在更复杂的系统生物学领域，扩增操作长片段 DNA时，PCR遇到新的挑战。长片段DNA扩增（>10kb）容易出现非特异片段或引物二聚体的扩增，与目标片段形成竞争扩增，从而降低了长目标片段

代谢异常是肿瘤细胞的重要特征之一，与肿瘤发生发展密切相关。氨基酸代谢是肿瘤代谢偏好的重要特征，是肿瘤诊疗的潜在靶点。本文介绍丝氨酸合成代谢在肝癌中的功能和机制，为丝氨酸代谢异常的靶点开发提供分子基础。 2024年6月，四川大学王魁研究团队在Nature Communications杂志上，发表“FBXO7 ubiquitinates PRMT1 to suppress serine synthesis and tumor growth in hepatocellular carcinoma”的研究成果，揭示了E3泛素连接酶FBXO7通过促进 PRMT1泛素化降解、抑制丝氨酸代谢

一、百萤 Annexin V-Cy5标记简介和工作原理 细胞凋亡是细胞的基本特征之一，它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定和一些疾病发生过程等方面起着十分重要的作用。 在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。在体内，巨噬细胞可以识别翻转到细胞膜表面的PS 从而将这些程序性死亡的细胞清除，因此凋亡过程中并不伴随局部的炎症反应，而在细

什么是RNA提取 细胞中的RNA可以分为信使RNA、转运RNA和核糖体RNA三大类,不同组织总RNA提取的实质就是将细胞裂解,释放出RNA,并通过不同方式去除蛋白,DNA等杂质,最终获得高纯度RNA产物的过程。 RNA提取的使用目的 通过总RNA提取可获得高纯度及高质量的总RNA,可用于实时荧光定量PCR、Northern blot、microRNA检测、芯片分析, DNA文库构建,基因克隆等实验。RNA用于不同的后续实验,其质量要求不尽相同。 cDNA文库构建要求RNA完整而无酶反应抑制物残留; Northern对RNA完整

百萤 Annexin V-AF488标记参数： Ex(nm)：499 E m(nm)：520 分子 量：~36000 溶 剂：Water 存储条件：在零下15度以下保存，避免光照 百萤 Annexin V-AF488适用仪器 （1）流式细胞仪 激发：488nm激光 发射：530/30nm滤波片 通道：FITC通道 （2）荧光显微镜 推荐孔板：黑色透明 通 道：Pacific Blue通道 百萤 Annexin V-AF488实验方案 概述 用测试化合物（200μL/样品）制备细胞 添加Annexin V结合物测定溶液 室温孵育30-60分钟 用流式细胞仪或荧光显微镜分析 1.用膜联蛋白V缀合物制备和孵

一、百萤 Annexin V-Cy3标记概述： Annexin V-Cy3标记是用于检测细胞功能的探针，膜联蛋白是钙依赖性磷脂结合蛋白家族。 它们富含真核生物，属于参与信号转导的普遍存在的细胞质蛋白家族。 膜联蛋白V的优先结合配偶体是磷脂酰丝氨酸（PS），其通常保持在细胞膜的内叶（细胞质侧）。 在细胞凋亡中，PS被转移到质膜的外部小叶。 磷脂酰丝氨酸在细胞表面上的出现是细胞凋亡的初始/中间阶段的通用指示，并且可以在观察到形态变化之前检测到。 我们的

注1:整个缀合过程可以在 一天内完成。但是，缀合前对APC 的纯化可能需要24-48小时。除了下面 列出的材料外，您还需要浓度至少为2mg/ml的抗体溶液。请您在进行APC抗体缀合实验之前熟悉 如何使用脱盐柱以及如何获取吸光度光谱。 注 2 : SMCC-APC缀合物非常稳定(在“交换缓冲液”中，在4℃下至少可以稳定几个月)。因此， 如果您需要节省一部分时间，可以选择同时缀合10毫克或更多的 APC,并将其用于几次抗体实验(在几周内)。 一 .APC的制备 1. 将APC纯化。缀

分析方案 概述 用测试化合物（200μL/样品）制备细胞 添加Annexin V结合物测定溶液 室温孵育30-60分钟 用流式细胞仪或荧光显微镜分析 1.用膜联蛋白V缀合物制备和孵育细胞： 1.1制备膜联蛋白V结合测定缓冲液：10mM HEPES，140mM NaCl和2.5mM CaCl2，pH 7.4。 1.2用测试化合物处理细胞一段所需的时间（用星形孢菌素处理的Jurkat细胞4-6小时）以诱导细胞凋亡。 1.3离心细胞，得到1-5×105个细胞/管。 1.4将细胞重悬于200μL膜联蛋白V结合测定缓冲液中（来自步骤1.1）。 1.5在

1.膜联蛋白结合缓冲液（10X）简介和工作原理 膜联蛋白 V 结合缓冲液 * 10X 优化用于成像和流式细胞术* 是一种等渗缓冲液，用于促进使用膜联蛋白 V 偶联物标记凋亡细胞。 该缓冲液的 pH 值为 7.4，含有浓度的钙，可促进膜联蛋白 V 与凋亡细胞表面暴露的磷脂酰丝氨酸残基结合。 膜联蛋白 V 结合缓冲液 *10X 优化用于成像和流式细胞术* 以 10X 浓缩液形式提供。 在膜联蛋白 V 染色之前，我们建议使用蒸馏水将 10X 浓缩液稀释为 1X 工作溶液。 实验后，丢弃

1 蛋白质表达量低：目标蛋白在样本中的表达量可能低于检测限，导致条带弱或不可见。 解决方法：使用更多的细胞或组织样本，或者增加蛋白的加载量。 2 不适当的抗体：使用的一抗或二抗可能特异性不强，或者稀释比例不当。 解决方法：验证抗体的特异性，优化抗体稀释比例。 3 样本处理不当：样本在裂解、煮沸或电泳过程中可能受到损坏。 解决方法：优化样本裂解条件，确保煮沸时间和电泳条件适宜。 4 转膜效率低：蛋白质可能未能有效从凝

铁死亡（Ferroptosis）是一种铁离子依赖的，脂质过氧化积累导致的细胞破裂程序性死亡，是一种区别于细胞凋亡坏死的新型细胞死亡方式。靶向铁死亡是开发肿瘤精准治疗的重要路径。 2024年2月，美国哥伦比亚大学顾伟教授团队在Cell Metabolism杂志上，发表“PHLDA2-mediated phosphatidic acid peroxidation triggers a distinct ferroptotic response during tumor suppression”的研究成果，揭示了一种膜结合蛋白PHLDA2（Pleckstrin homology-like domain family A member 2）介导且不依赖于GPX4的新型铁

ChIP实验详细操作流程及质控 一、交联和细胞颗粒的分离 1. 在每个含有细胞培养基的培养皿中，加入足够数量的16%甲醛，以获得最终浓度的1%甲醛。 2. 轻轻地晃动均匀。在化学通风柜中，在室温下孵育10分钟。 3. 在每个含有细胞培养基和甲醛的培养皿中，加入甘氨酸溶液（10X），最终浓度为1X。轻轻地晃动均匀。在化学通风柜中室温孵育5分钟。 4. 在通风柜中吸入含甲醛/甘氨酸的介质。正确处理含甲醛的废物。 5. 用一个培养基体积的预冷PBS清洗细胞两

Annexin V是一种高效的蛋白质，广泛应用于细胞生物学研究。它具有高亲和力，能够特异性地结合到外翻的磷脂酰丝氨酸（PS）上，这一现象在细胞凋亡早期阶段尤为明显。因此，Annexin V已成为检测细胞凋亡的标准工具。 荧光标记的Annexin V更是如虎添翼，通过与不同颜色的荧光染料结合，研究人员可以在流式细胞术和荧光显微镜等技术中，轻松、高效地检测和分析细胞凋亡。 Annexin V有以下几个优点： 1. 高灵敏度和特异性：荧光标记的Annexin V能够准确识

哪位老师知道这个细长的杂质是什么 MRC-5贴壁细胞培养中遇到的

吧友能不能帮忙看看细胞是啥问题呀，没啥贴壁的

有100多种细胞系。低价出，都带str

一、百萤iFluor 560-dUTP*1mM TE 缓冲液(pH 7.5)*参数 Ex(nm) 560 Em(nm) 571 分子量 N/A 溶 剂 Water 存储条件 在-15℃以下保存，避光防潮 外 观 液体 二、百萤iFluor 560-dUTP*1mM TE 缓冲液(pH 7.5)*概述 iFluor 560-dUTP 是一种 iFluor 560 修饰的核苷酸，可用于各种分子生物学应用，例如 DNA 分子的标记和检测。它包含通过连接臂连接到脱氧尿苷三磷酸 (dUTP) 分子的 iFluor 560 染料。当在合成过程中掺入 DNA 时，iFluor 560-dUTP 可以使用荧光显微镜或其他基于荧光的测定法进行可视化。它常

质粒提取通常采用强碱裂解法，该方法由Birnboim和Doly在1979年发明，至今已成为实验室常规操作之一。今天给小伙伴们详细介绍在质粒提取过程中使用的不同溶液及其原理： 溶液P1 组分：25 mM Tris-HCl（pH 8.0），10 mM EDTA，50 mM 葡萄糖 作用：使菌体沉淀悬浮，Tris-HCl作为缓冲溶液维持pH稳定，EDTA螯合金属离子抑制DNase活性，葡萄糖增加粘度助于菌体悬浮。 溶液P2 组分：250 mM NaOH，1% SDS（十二烷基硫酸钠） 作用：细胞裂解，NaOH破坏细胞膜结构导致细胞裂解，

ChIRP-Mass是一种检测细胞内RNA/蛋白互作组的高通量技术。该技术通过联合探针Pulldown共沉淀技术和质谱检测技术，对目的RNA在特定细胞/组织内的互作蛋白，进行系统的检测和分析。该技术适用于目的RNA在特定细胞/组织中的蛋白互作组数据检测，或用于不同遗传背景/实验条件下的互作组差异研究。因此，该技术是研究细胞内RNA互作调控网络的常规前置技术。 ChIRP-WB是一种检测细胞内RNA/蛋白互作的靶向验证技术。通过联合探针Pulldown共沉淀和Western Blot检

1. 百萤iFluor 488-dUTP* 1mM的Tris缓冲液（pH7.5）*的应用 染料修饰的脱氧尿苷5'-三磷酸酯是通过常规酶掺入方法（例如反转录，缺口翻译，随机引物标记或PCR）生产染料标记DNA的常用方法之一。 这种酶促荧光标记方法广泛用于FISH探针和基于微阵列的实验。 该iFluor 488-dUTP缀合物与SpectrumGreen 滤光片组合一起用作绿色荧光（SpectrumGreen 是Vysis的商标）。 与常用的绿色探针（例如Fluorescein-12-dUTP）相比，iFluor 488提供了更明亮的信号，具有很高的光稳定性，并且

引文：该文的通讯作者是英国The University of Manchester（曼彻斯特大学）肿瘤研究所Tim Somervaille教授，该团队专注急髓白血病（AML）病理研究，聚焦AML分化的新药靶机理和医学转化。值得关注的是团队开发的新药靶赖氨酸脱甲基酶LSD1，其抑制剂已开展临床研究。进一步的转化结果，值得期待。本文是该团队于发表2023年11月22日发表在肿瘤Top期刊《Cancer Cell》上关于化药的药理文章。药物是临床试验中的化药CCS1477（Inobrodib），抑制靶点是乙酰修饰酶EP300/CBP

求D-Hanks配方

蛋白酶消化液配置步骤 1．D-Hanks液高压灭菌之后，晾至室温，4℃保存备用。 2．称取一定量胰蛋白酶粉末于研磨器中(夏天时研磨器应放在冰浴中)，加入少量D-Hanks液研磨1 000次左右，调制成糊状。再放入4℃预冷的适量D-Hanks液中，4℃下磁力搅拌使完全溶解。 3．用NaHCO3干粉将胰酶溶液的pH值调至8.0左右(胰酶作用的最适pH值)，并加入0.02%EDTA以协助消化作用。 4．滤过除菌，-20℃冻存。 蛋白酶消化液配置过程中的注意事项： 1．BSS的pH值应确定为7.2左右。 2

在进行液体制剂的制备时，为了确保最终溶液达到预期的pH值和精确浓度，我们通常遵循以下步骤： 调节pH值：首先，我们需要将所需的溶质溶解在部分溶剂中，然后逐渐加入酸或碱来调整溶液的pH值至所需水平。在这个过程中，要不断地测量pH值，直至稳定在我们预定的数值。 定容到全量：pH值调节完成后，接下来就是定容操作。我们将溶液转移到容量瓶中，慢慢地加入溶剂，直到液面恰好与容量瓶的标线对齐。要注意的是，加溶剂的过程中要小心谨