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孔雀石绿（MG）和结晶紫（CV）具有高毒素、高残留和致癌、致畸、致突变等特点，当其进入生物体内，就会产生具有更强危害的隐性孔雀石绿（LMG）和隐性结晶紫（LCV）。鉴于孔雀石绿和结晶紫的危害性，包括我国在内的许多国家都将它们列为水产养殖中的禁用药物。
《GB/T 19857-2005 水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定》和《SN/T 1479-2004 进出口水产品中孔雀石绿残留量检验方法》中均采用有机溶剂提取后经固相萃取柱净化，然后采用高效液相色谱法或液相色谱-串联质谱法测定。
迪马科技在参考上述两个标准的基础上开发出中性氧化铝和阳离子交换固相萃取柱串联净化后，反相高效液相色谱柱检测。该方法准确可靠，重复性好，回收率高，可作为水产品中孔雀石绿和结晶紫及代谢物的检测方法。
水产品中孔雀石绿和结晶紫及其代谢物的检测
(参考《SN/T 1479-2004进出口水产品中孔雀石绿残留量检验方法》和 《GB/T 19857-2005 水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定》)
1 适用范围
本方法适用于水产品中孔雀石绿和结晶紫及其代谢物的检测。
2 样品准备/提取
1、称取已粉碎（已均质）的样品1 g于15 mL离心管中，加入1 mL 0.05 mol/L苯磺酸溶液、1 mL0.25 g/mL盐酸羟铵溶液、0.4 mL0.1 mol/L乙酸铵溶液(pH4.5)和8 mL乙腈，涡旋混合2 min，4000 rpm离心1 min；
2、将上清液转移至50 mL离心管中，残渣按照步骤1重复提取一次；
3、合并两次提取液，并加入6 mL三氯甲烷和7 mL水，涡旋混合1 min，4000 rpm离心1 min；
4、取下层清液于旋蒸瓶中，向上层清液加入6 mL三氯甲烷，重复提取一次；
5、合并两次下层三氯甲烷溶液，40℃减压蒸至近干，加入5 mL乙腈待净化。
3 SPE柱净化——ProElut Al-N（1 g/6 mL）（Cat.#：65306）上层
ProElut SCX（500 mg/3 mL）（Cat.#：63604）下层
(1)活 化：
加入10 mL乙腈，流出液弃去；
(2)上 样：
将待净化液加入小柱，流出液弃去；
(3)淋 洗：
加入5 mL乙腈淋洗小柱，流出液弃去，并去掉上层Al-N小柱；
(4)洗 脱：
加入5 mL5%氨水乙腈，收集洗脱液；
(5)重新溶解：
将洗脱液在40 ℃下减压蒸干，1 mL定容液*溶解残渣，过微孔滤膜供HPLC分析。
*定容液：乙酸铵缓冲液：盐酸羟铵溶液=2：1
乙酸铵缓冲液：乙腈：0.05 mol/L乙酸铵溶液(pH4.5)=75:25；
盐酸羟铵溶液：取1 mL0.25 g/mL盐酸羟铵溶液用水定容至100mL。
4 分析条件
色谱柱：
Platisil ODS，250 x 4.6 mm，5 μm（Cat.# 99503）
流 速：
1.0 mL/min
检测器：
UV 591 nm和UV 266 nm
柱 温：
30 ℃
进样量：
20 μL
流动相：
A：乙腈 B：0.05 mol/L乙酸铵溶液(pH4.5)
梯度：




6 Diamonsil C18(2) 测定孔雀石绿和结晶紫及其代谢物结果
6.1样品制备
制备方法：1.0 mg/L孔雀石绿标准溶液(流动相配制)
6.2 分析条件
色谱柱：
Diamonsil C18（2），250 mm × 4.6 mm，5μm（Cat#：99603）
流 速： 1.0 mL/min
检测器： UV 591 nm和UV 266 nm
柱 温： 30 ℃
进样量： 20 μL
流动相： A：乙腈 B：0.05 mol/L乙酸铵溶液(pH4.5)
梯度：


水产品种孔雀石绿和结晶紫及其代谢物的检测（大部分有现货）
参考《SN/T 1479-2004进出口水产品中孔雀石绿残留量检验方法》和 《GB/T 19857-2005 水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定》

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