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简易版透明染色骨骼标本制作(单、双染)

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一楼祭被吞光光的老教程


IP属地:法国1楼2019-05-25 21:26回复
    材料
    1. 过氧化氢
    2. 氢氧化钾
    3. 95%乙醇
    4. 冰醋酸
    5. 阿利新蓝
    6. 茜素红
    7. 甘油
    8. 百里香酚
    9. 纯净水


    IP属地:法国2楼2019-05-25 21:26
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      步骤
      1. 固定。将标本置于95%或100%乙醇中浸泡一周以上,个体较大的标本需要浸泡更长时间。
      2. 解剖。去除内脏和脂肪,不损伤骨骼的前提下尽量去除表皮和鳞片。
      3. 软骨染色。将样本置于30%乙酸+70%乙醇+阿利新蓝染色中1天。染色结束时软骨应呈蓝色。
      4. 复水。用大量水浸泡标本12-24小时,勤换水,将标本内酒精和醋酸彻底溶出。
      5.预透明。将标本放入1% KOH溶液中浸泡至可见脊椎(十几分钟到几小时不等),可根据标本大小自行增减浓度,浸泡时间不要过长。
      此步骤标本变为果冻状,注意观察,若标本肌肉甚至骨骼被溶解立刻降低KOH浓度。
      6. 硬骨染色。配制茜素红乙醇饱和溶液 ,加入 9倍体积的 1% 氢氧化钾溶液 ,浸泡1-2天,直到硬骨染为紫红色。浸泡时间不要过长,以免后续软组织脱色困难。
      此步骤要注意观察,防止标本被溶解。硬骨染色液配方不止一种,熟悉操作后可自行摸索效果合适的配比。
      7.漂白。将样品置于3%过氧化氢溶液中浸泡数小时,注意不要让骨骼被漂白。若标本色素沉积较少,可跳过此步骤。
      8. 梯度甘油透明。水:1%KOH溶液:甘油=5:3:2配置透明液,混匀后放入标本直至软组织变得透明,期间需要换液,浸泡时间几天至几个月(取决于大小和染色程度),直到完全去除软组织颜色。此时标本应骨骼颜色清晰,软组织几乎无色。用40%、60%、80% 和 100% 浓度的甘油梯度浸泡,最后转移至纯甘油中保存,加入少量百里香酚防腐。
      注:保存不当的标本软骨上色不佳,若只染硬骨(红色)可跳过步骤3。
      纯属个人经验,请勿随意截取抄袭。


      IP属地:法国3楼2019-05-25 21:27
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        双染先染蓝色在复水。单染复水在染色是吗?


        IP属地:浙江来自Android客户端5楼2019-05-26 19:20
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          来个图文过程呗


          IP属地:安徽来自Android客户端6楼2019-06-30 22:14
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            你的脱脂呢?


            IP属地:四川来自Android客户端7楼2019-07-14 06:55
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              脱脂真心头疼


              来自Android客户端8楼2019-07-18 22:32
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                30%乙酸+70%乙醇是浓度还是比例


                IP属地:天津来自Android客户端9楼2019-10-24 10:34
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                  制作标本兼治成本高吗


                  IP属地:山东来自Android客户端10楼2019-11-30 11:14
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                    两种染色剂用完都可以回收吗


                    IP属地:广东12楼2020-11-19 19:03
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                      有联系方式吗


                      IP属地:浙江来自Android客户端13楼2020-12-13 00:07
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                        解刨后直接用乙醇加乙酸和阿利新兰侵泡吗?有没有比例的公式,多大的骨头配比多少的量


                        来自手机贴吧15楼2021-07-26 00:53
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                          这个是双染还是单染?还有冰醋酸的浓度是多少呀?请请教一下


                          IP属地:江苏来自Android客户端17楼2022-09-13 15:31
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                            氢氧化钠可以吗


                            IP属地:安徽来自Android客户端18楼2023-08-15 09:53
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