截取HEV序列文件“AR207634-US.seq”编码氨基酸的第459-602位氨基酸序列,保存为E2s.pro,并转换成为大肠杆菌密码子偏嗜的基因,保存为E2s_ecoli.seq;
5’端引入BamHI位点(GGATCC),3’端引入EcoRI位点(GAATTC),设计PCR引物,将目的基因克隆到pRSET B载体中;
根据提供的质粒信息,画出克隆后的质粒图谱(质粒序列文件:pRSET-B.fasta):
质粒名称:“pRSET B”
质粒长度:“2887 bp”
T7启动子:“T7 promoter” 20-39bp (黄色实心箭头表示)
6xHis标签:“His Tag” 112-129bp
多克隆位点:“MCS” 202-248bp,并依次标注酶切位点:“BamHI”、“XhoI”、“SacI”、“BglII”、“PstI”、“PvuII”、“KpnI”、“NcoI”、“EcoRI”、“BstBI”和“HindIII”
f1起始位点:“f1 origin” 456-911bp(绿色实心箭头表示)
氨卞青霉素抗性基因:“Ampicillin” 1042-1902bp(红色实心箭头表示)
pUC启动子:“pUC origin” 2047-2720bp(蓝色实心箭头表示)