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为什么说它是3D细胞培养小助手

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PuraMatrix是个啥?
PuraMatrix由麻省理工开发,由1%w/v的合成多肽及99%的水组成,为合成的生物材料,具有生物兼容性,无动物源性及病原体,平均孔径50-200 nm,适用于多种细胞贴壁和增殖培养,可用于细胞3D 培养。
PuraMatrix的功能
促进增殖和分化:原代肝细胞,大鼠PC12细胞,海马细胞,内皮细胞等。
促进原代细胞贴壁和增殖:原代神经细胞,原代成纤维细胞,原代角化细胞等。
支持转染细胞的增长:MG-63,SH-SY5Y,HEK293,NIH3T3等。
其他应用:干细胞增殖,肿瘤细胞迁移/侵袭,血管生成,体内组织再生。
3D细胞培养的方法
拿到PuraMatrix后,建议先分装,分装以及每次使用之前采用超声或者涡旋震荡30分钟,降低PuraMatrix (1% w/v) 的粘度。如果有气泡产生,可以将分装后的小管离心去除气泡。(注:如果没有进行降低浓度的处理,在离心管中PuraMatrix进行稀释并加入细胞悬液后,会粘附在离心管管壁上,无法转移到板空进行正常的3D培养。)
采用20%浓度的蔗糖溶液将PuraMatrix稀释到2X 所需浓度。添加体积请参照下表。
消化并收集细胞(一般为5x105-1x106cells/ml)。
离心去除培养液,并用10%蔗糖溶液重悬细胞到需要的浓度。
再次离心,并用10%的蔗糖溶液重悬细胞到所需终浓度的2倍浓度的细胞。
将等体积的2X PuraMatrix™ 和2X cell/sucrose混合,然后小心的将混合物添加到一个孔板中心,注意不要有气泡。每一个孔的用量单独混匀。
轻柔的将培养基沿板孔壁加入凝胶表面,因为PH的改变PuraMatrix开始凝胶。(注:1.PuraMatrix在盐离子浓度≥1mM时还是凝胶,所以需要凝胶的时候再添加含盐离子缓冲液或者培养基。2.PuraMatrix本身的pH是2-2.5,在做3D培养的时候,尽量减少细胞和PuraMatrix单独接触的时间,将细胞和PuraMatrix在蔗糖溶液中混合后,加入板孔,立即加入培养基。)
每个板孔均需要提前用离心管混合PuraMatrix和细胞,然后转移到孔板中,加入培养基,再混合第二个板空所需要的混合物。
加入培养基开始凝胶后的一小时内,轻柔的进行两次换液,进一步的平衡PuraMatrix的PH值,禁止使用真空抽液装置,每次换液只更换 2/3 到 3/4的液体量,避免破坏PuraMatrix的胶层。
list-style: none; max-width: 100%; min-height: 1em;">完全成胶后可以按照常规细胞培养的换液频率进行换液,注意换液的时候操作参照步骤9的要求。


1楼2022-07-21 15:20回复