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实验课求助

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SDS法提取人类基因组DNA,原料是在下的脱落口腔上皮细胞。加氯化钠离心后沉淀分层,上层是这种黄的胶冻状屋子,下层应该是蛋白质。上清液加到乙醇里面之后没有看到明显的絮状沉淀。求问可能是什么原因?


IP属地:北京来自Android客户端1楼2022-11-22 13:09回复
    额,听我搞医学的朋友说他们提的DNA从来看不见,都是跑电泳之后才能确定
    我提植物的倒是个个絮状物沉淀
    也可能你方法有问题吧,我一直用CTAB,SDS已经忘了


    IP属地:福建来自Android客户端2楼2022-11-22 16:11
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      可以给点详细的溶液参数吗,各个实验室用的溶液不太一样,你这个SDS是什么时候加入的,一般加SDS应该就可以看到沉淀了,NACl什么浓度也很重要,一般不会有胶冻才对。


      IP属地:上海3楼2022-11-22 17:19
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        而且我记得我们实验室上次做这个加氯化钠之后反而弃去上清,因为NaCl一般不会导致细胞裂解,离心后反而是弃去上清。然后加入裂解液再加SDS之类的


        IP属地:上海4楼2022-11-22 17:23
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          我们实验室10^6个细胞最终得到DNA沉淀量估计下也就大约几个平方毫米的白色 你的口腔上皮细胞刮了多少下来啊 方便说下你的具体步骤吗


          IP属地:陕西来自iPhone客户端5楼2022-11-22 17:46
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            DNA越纯越透明
            如PCR引物,充分干燥后根本看不见,装引物的ep管宛如空管
            哪怕最后用低温70%乙醇处理也是如此——除非提取量很大(如鼠尾)才会在ep管底部出现少许白点
            另外你这提取样本量太少——不就是棉签刮刮口腔的程度,能有多少东西?而提取的容器又太大——目测是15ml管,太大了要知道DNA只是在70%乙醇里溶解度“最小”而不是“完全不溶”,乙醇加太多也会把你DNA溶掉,而避免这样的方法就是更换小一点的容器(比如1.5ml ep管)、减少乙醇用量(比如一次用1ml)和清洗次数


            IP属地:上海来自Android客户端6楼2022-11-22 21:54
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              太少了看不出来


              IP属地:北京来自Android客户端7楼2022-11-22 21:55
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                估计是沉淀破裂了,缺少元素液体


                IP属地:河南来自Android客户端8楼2022-11-23 22:14
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                  IP属地:北京来自Android客户端9楼2022-11-30 23:11
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                    然后,跑出来了。全是蛋白质,一点DNA都没
                    当天我有点口腔溃疡,跟这有关系吗


                    IP属地:北京来自Android客户端10楼2022-11-30 23:12
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