一革兰氏染色法1 操作步骤 涂片：将培养的不同菌分别作涂片（注意涂片切不可过于浓厚），干燥、固定。固定时通过火焰1-2 次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。初染：加结晶紫液盖满标本处，染一分钟后水洗，并将玻片上积水轻轻甩净。媒染：加碘液盖满标本处，1分钟后水洗，甩净玻片上积水。脱色：加95%酒精盖满标本，轻轻摇动玻片，约20秒钟后水洗、甩干。复染：加稀释石炭酸复红液或沙黄溶液1-2滴盖满标本，染30秒钟后水洗，待标本自干或用吸水纸印干。观察：镜检干燥后置油镜观察，革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。二乳酸酚棉蓝染色法1 操作步骤 染色：于洁净载玻片上，滴1-2滴乳酸酚棉蓝染色液，用解剖针从霉菌菌落的边缘外取少量带有 孢子的菌丝置于染色液中，再细心地将菌丝挑散开，然后小心地盖上盖玻片，注意不要产生气泡。置显微镜下先用低倍镜观察，必要时再换高倍镜。 观察：染好后的标本片用显微镜观察结果，酵母菌细胞、菌丝体和产孢结构等皆可被染成亮蓝色；背景为暗淡的蓝色。 三芽孢染色法1 操作步骤一般革兰氏染色只能把芽孢周围的细胞质染色，不能直接把芽孢染上，故芽孢会透亮，能够观察到芽孢。若不清晰可进一步采用芽孢染色法。染色：用接种环取菌样涂布于玻片上，待自然干燥。而后通过火焰加热将菌固定于玻片上。将涂片放入平皿内，片上放两层滤纸，滴加足量的5.0%孔雀绿水溶液。将平皿盖好，54℃-56℃水浴加热30min。取出，去滤纸，用纯化水冲洗残留孔雀绿溶液。加0.5% 沙黄水溶液，染1min。水洗，待干后油镜观察。观察：染好后的标本片用显微镜观察结果，芽孢呈绿色，菌体呈红色。四荚膜染色法荚膜(capsule)是某些细菌表面的特殊结构，是位于细胞壁表面的一层松散的粘液物质，荚膜的成分因不同菌种而异，主要是由葡萄糖与葡萄糖醛酸组成的聚合物。1 操作步骤涂片：按常规法涂片，可多挑些菌体与水充分混合，并将粘稠菌液尽量涂开，涂布面积不宜过大。干燥：在空气中自然干燥。染色：用溶液A染5-7分钟。脱色：用溶液B洗去结晶紫，脱色要适度（冲洗2遍）。用吸水纸吸干，并立即加1-2滴香柏油于涂片处，以防止CuSO4结晶的形成。镜检。观察：背景蓝紫色，菌体紫色，荚膜无色或浅紫色。