Raw264.7细胞是一种常用的巨噬细胞系，用于研究炎症和免疫相关的生物学问题。下面将介绍如何培养Raw264.7细胞，包括培养基组成、培养条件和传代方法等方面。
一、培养基组成
Raw264.7细胞的培养基通常包括DMEM培养基、10%胎牛血清、100 U/mL青霉素和100 μg/mL链霉素。此外，还可以添加一些必需氨基酸、维生素和微量元素等成分。培养基中的胎牛血清可以提供细胞所需的营养物质和生长因子，促进细胞的生长和增殖。
二、培养条件
1.温度、CO2浓度和湿度
Raw264.7细胞的培养条件通常为37℃、5% CO2和湿度在95%左右的环境。要保持适宜的CO2浓度和湿度，可以使用CO2培养箱或CO2孵化器。在培养期间，需要定期更换培养基，以保持细胞的正常生长和代谢。
2.培养容器
Raw264.7细胞可以在培养瓶、培养皿或多孔板中进行培养。通常使用表面涂有聚-L-赖氨酸或胶原等物质的培养器皿，以促进细胞附着和生长。
三、传代方法
Raw264.7细胞的传代方法通常使用胰蛋白酶进行细胞剥离和分离。传代前需要将细胞培养至80-90%的密度，并在剥离细胞前进行培养基的更换。具体步骤如下：
1.将培养瓶中的培养基抽掉，加入2 mL 0.25%胰蛋白酶。
2.将细胞培养在37℃下，直到细胞开始分离（通常需要1-5分钟）。
3.加入适量的培养基，停止胰蛋白酶的作用。
4.将细胞收集到离心管中，并离心10分钟。
5.去除上清液，加入新的培养基，将细胞重新分散并移入新的培养瓶中。
注意事项：
1.传代时需要严格控制胰蛋白酶的作用时间，以避免影响细胞的生长和代谢。
2.传代时需要控制细胞密度，以避免细胞过度生长和过度密集。
3.传代时需要使用无菌操作，以避免细胞污染和细胞死亡。
综上所述，Raw264.7细胞的培养需要注意培养基组成、培养条件和传代方法等方面。在培养期间需要定期更换培养基，并严格控制细胞密度和传代方法，以保持细胞的正常生长和代谢。